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大鼠ELISA试剂盒的操作要点不可不知
发布时间:2019-05-06   点击次数:132次
   大鼠ELISA试剂盒的操作要点不可不知
  大鼠ELISA试剂盒在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。如双抗体夹心法、间接法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。应用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入,再与HRP标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
  大鼠ELISA试剂盒的操作要点:
  实验通常为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定模式,大鼠ELISA试剂盒测定操作非常简单,一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面,其中任一步骤的不当都会影响大鼠ELISA试剂盒测定结果,且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。正确的加样方法应为45度,吸头贴着孔壁加入,应注意角度太小,会使液体残留在孔壁上,导致加样不准确;吸头应当贴着管壁和液面的交界处!
  冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。
  血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、收缩后即可取得。除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在elisa试剂盒中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的大鼠ELISA试剂盒测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。

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