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关于小鼠ELISA试剂盒标本处理时几个不可忽视的细节说明
发布时间:2019-03-05   点击次数:14次
   关于小鼠ELISA试剂盒标本处理时几个不可忽视的细节说明
  小鼠ELISA试剂盒可测定微量样本(标准操作法是5μL)。测定小鼠血清或者血浆(肝素血浆除外)中的抗dsDNA 抗体浓度。1个试剂盒可做96孔。标准品是小鼠源。全部试剂均为液体。全反应时间是4小时20分钟。
  测定原理:
  小鼠ELISA试剂盒是标准品、稀释样本在抗原包被的微孔板中进行孵育处理。孵育2小时后清洗,加入过氧化物酶结合抗小鼠IgG抗体,与捕捉的抗体孵育2小时。清洗后,显色剂(TMB)与孔中残留的过氧化物酶反应。添加酸性溶液可终止反应。反应生成的黄色产物在450nm处(副波长620nm)测定。吸光度与抗小鼠dsDNA 抗体浓度成正比。标准品浓度对应吸光度可制作成标准曲线。通过标准曲线获得未知样本浓度。
  小鼠ELISA试剂盒的标本处理问题不容忽视,因此,关于标本处理,您需要知道下列这几点:
  1、公司只对试剂盒本身负责,不对因使用小鼠ELISA试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。
  2、实验前应预测标本含量,如果标本浓度过高,应对标本进行稀释,使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。
  3、若样本为细胞培养上清,因该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采样时间等,所以可能存在检测不出的情况。
  4、建议使用新鲜样本,保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。
  5、若所检样本不包含在说明书所列样本之中,建议进行预实验验证其有效性,并注意留存样本。
  6、使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
  7、某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与小鼠ELISA试剂盒所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配,而不被检测出。

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